生态毒理学报

2018, v.13(03) 138-145

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利用CRISPR/Cas9系统敲除斑马鱼bco1基因与bco1l基因
Next-generation Knock-out Technology of bco1 and bco1l Genes in Zebrafish by Using CRISPR/Cas9 System

李文龙;冯永永;李凯彬;聂湘平;

摘要(Abstract):

β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶(β-carotene-15,15'-momoxygenase 1,bco1)是β-胡萝卜素转化成维生素A过程中的关键酶,bco1与bco1l是编码此酶的主要基因。本实验利用CRISPR/Cas9技术敲除斑马鱼的与β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶编码相关的基因bco1与bco1l,以便深入开展对斑马鱼bco1的功能研究。分别在斑马鱼bco1与bco1l基因2号外显子选取sg RNA识别位点,体外转录制备sg RNA并与Cas9 m RNA混合对斑马鱼Ⅰ细胞期受精卵进行显微注射,24 h后收集部分胚胎进行PCR检测并将PCR产物进行单克隆测序确定sg RNA的有效性,构建首建鱼,并在此基础上通过PCR检测、凝胶电泳及测序筛选可遗传突变体。本研究分别获得了bco1基因突变与bco1l基因突变,分析表明这些缺失和插入均可导致编码序列的移码,为研究鱼类胡萝卜素代谢及相关发育过程等后续研究提供了材料。

关键词(KeyWords): β-胡萝卜素-15,15'-加氧酶;斑马鱼;CRISPR/Cas9技术;基因敲除

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家科技支撑计划项目:鱼类实验动物新资源的开发与标准化研究(2015BAI09B05)

作者(Author): 李文龙;冯永永;李凯彬;聂湘平;

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