生态毒理学报

2019, v.14(05) 236-243

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Hg~(2+)和Pb~(2+)对中国鲎N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶的影响
Effects of Hg~(2+) and Pb~(2+) on N-acetyl-β-D-glucosaminidase of Tachypleus tridentatus

林建城;罗新明;林娟娟;

摘要(Abstract):

节肢动物蜕皮与N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(EC3.2.1.52,NAGase)密切相关。为了探究Hg~(2+)和Pb~(2+)这2种重金属离子对节肢动物NAGase的影响,以中国鲎(Tachypleus tridentatus)为材料,从其内脏分离提取了NAGase。利用酶促反应动力学方法,研究Hg~(2+)和Pb~(2+)对中国鲎NAGase的影响;通过对酶荧光发射光谱的测定,研究NAGase酶蛋白经Hg~(2+)和Pb~(2+)作用后的空间构象变化。结果表明,Hg~(2+)和Pb~(2+)对中国鲎NAGase均有较强的抑制作用,Hg~(2+)对NAGase的抑制作用强于Pb~(2+),Hg~(2+)和Pb~(2+)对NAGase的抑制作用均表现为可逆过程,其中Hg~(2+)对NAGase的抑制属于竞争性抑制作用,抑制常数KI为22.68μmol·L~(-1),Hg~(2+)只与游离酶结合,不与酶-底物络合物结合;而Pb~(2+)对NAGase的抑制是属于竞争性-非竞争性混合型抑制作用,抑制常数KI和KIS分别为19.13 mmol·L~(-1)和75.23 mmol·L~(-1),Pb~(2+)与游离酶的亲和力相比与酶-底物络合物的亲和力更强。NAGase经Hg~(2+)和Pb~(2+)作用后荧光发射强度均降低,但荧光发射峰值并没有发生位移,说明Hg~(2+)和Pb~(2+)对中国鲎NAGase的抑制作用均为酶蛋白空间构象的变化所致。这证明了Hg~(2+)和Pb~(2+)对中国鲎NAGase活力具调控作用。

关键词(KeyWords): Hg2+;Pb2+;中国鲎;N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶;抑制作用;构象变化

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 福建省自然科学基金项目(2018J01467);; 福建省新型污染物生态毒理效应与控制重点实验室开放课题(PY16009);; 莆田学院科研课题(2018005)

作者(Author): 林建城;罗新明;林娟娟;

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