生态毒理学报

2019, v.14(05) 108-113

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酵母双杂交技术构建稀有鮈鲫不同雌激素受体亚型的重组荧光酵母
Construction of the Rare Minnow Different Estrogen Receptor Subtypes Recombinant Fluorescent Yeasts Using Two-Hybrid Yeast Technique

季晓亚;杨明嘉;黄超;袁圣武;周小红;饶凯锋;马梅;王子健;

摘要(Abstract):

目前关于环境雌激素(environmental estrogens,EEs)的效应评估大多数是基于人的雌激素受体(estrogen receptor,ER)的离体检测,缺乏EEs对鱼类ER影响的研究。本研究利用酵母双杂交技术构建模式生物稀有鮈鲫不同ER亚型重组荧光双杂交酵母,用以快速检测EEs的雌激素活性并研究不同ER亚型对17β-雌二醇(E_2)敏感度的差异。采用反转录多聚酶链反应法获取稀有鮈鲫ERα、ERβ1和ERβ2的配体结合域(LBD)序列,构建并鉴别诱饵质粒pGBKT7-ERα-LBD、p GBKT7-ERβ1-LBD和pGBKT7-ERβ2-LBD。将诱饵质粒和猎物质粒pGAD424-GRIP1同时转化荧光酵母Y187-Luc,分别构建3株稀有鮈鲫ERα-GRIP1、ERβ1-GRIP1和ERβ2-GRIP1重组荧光双杂交酵母,并考察了E_2、双氢睾酮(DHT)、9-顺维甲酸(9-cis RA)、三碘甲状腺原氨酸(T_3)和孕酮(PG)对荧光素酶的诱导情况。结果显示:ERα-GRIP1、ERβ1-GRIP1和ERβ2-GRIP1重组荧光双杂交酵母能够专一性地被E_2诱导产生荧光素酶,并存在显著的剂量-效应关系,半数效应浓度(EC_(50))值分别为1.98×10~(-9)、1.77×10~(-10)、和3.52×10~(-10)mol·L~(-1),对E_2的敏感程度排序为:ERβ1-GRIP1>ERβ2-GRIP1>ERα-GRIP1。研究表明,稀有鮈鲫不同ER亚型对E_2的响应具有差异,3株重组荧光双杂交酵母不仅可以应用于快速识别内分泌干扰物中的类雌激素物质,分析稀有鮈鲫不同ER亚型对EEs的敏感性,解析雌激素污染物对稀有鮈鲫的作用机制,评估鱼类接触EEs的潜在风险,以期为水质保障和污染治理提供重要依据。

关键词(KeyWords): 雌激素;17β-雌二醇;稀有鮈鲫;酵母双杂交;雌激素受体;荧光酵母;雌激素效应

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 中国科学院前沿科学重点项目(QYZDY-SSW-DQC004);; 自然科学基金重点项目(21437006);; 广东省省级科技计划项目(2016B0202);; 环境模拟与污染控制国家重点联合实验室联合基金项目(17L04ESPC)

作者(Author): 季晓亚;杨明嘉;黄超;袁圣武;周小红;饶凯锋;马梅;王子健;

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