生态毒理学报

2018, v.13(01) 201-209

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测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究
Microplate Absorbance-Based Toxicity Bioassay by Analysis of in Vitro Inhibition of Acetylcholinesterase

陶珊珊;葛会林;袁宏球;阳辛凤;

摘要(Abstract):

随着化学污染物种类与数量的日益增多,高通量测试方法显得越来越重要。基于乙酰胆碱酯酶(ACh E)抑制法原理,以多功能酶标仪为测试设备,96孔微板为暴露反应载体,建立了测定化学物对ACh E抑制毒性的微板吸光法。系统研究了ACh E浓度、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)浓度对显色吸光度、吸光度变化速率、化学物测试毒性的影响。结果表明,随着ACh E、DTNB、ATCI的浓度增加,吸光度均增加;吸光度变化速率与ACh E浓度呈正相关,与DTNB浓度基本无关,与ATCI浓度呈现先增后减的双相关系;随着ATCI浓度增加,灭多威剂量-效应曲线(DRC)向右移动。最终建立的优化测试条件为DTNB 0.2 g·L~(-1)、ATCI 0.2 g·L~(-1)、ACh E 0.04 U·m L~(-1)、p H 6.8、反应温度29℃及暴露时间15 min;并与国标方法进行了对比与验证,发现试剂加样顺序对毒性测定结果有显著影响。基于ACh E的微板毒性测试结果表明,灭多威的DRC呈现良好的S型曲线,可用Weibull函数有效表征,拟合决定系数R2大于0.97,空白变异控制在了±10%以内。此方法可用于化学污染物的高通量毒性检测。

关键词(KeyWords): 灭多威;乙酰胆碱酯酶;剂量-效应曲线;微板吸光法;双相关系

Abstract:

Keywords:

基金项目(Foundation): 国家自然科学基金(21607171);; 海南省应用技术研发与示范推广专项(ZDXM2014047,ZDXM20130043);; 海南省自然科学基金(213027)

作者(Author): 陶珊珊;葛会林;袁宏球;阳辛凤;

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参考文献(References):

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